薄層色譜(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示，又稱薄層層析，屬于固－液吸附色譜。是近年來發(fā)展起來的一種微量、快速而簡單的色譜法，它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點，能快速鑒別植物提取物。

一、什么是薄層色譜？

薄層色譜法（TLC），系將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層。待點樣、展開后，根據(jù)比移值（Rf）與適宜的對照物按同法所得的色譜圖的比移值（Rf）作對比，用以進行藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測定的方法。薄層色譜法是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實驗技術，也用于跟蹤反應進程。

二、薄層色譜原理

薄層色譜法是一種吸附薄層色譜分離法，它利用各成分對同一吸附劑吸附能力不同，使在流動相（溶劑）流過固定相（吸附劑）的過程中，連續(xù)的產(chǎn)生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，從而達到各成分的互相分離的目的。

三、薄層色譜法發(fā)展歷史及現(xiàn)狀

1、薄層色譜在中藥分析中的簡單回顧

自20世紀60年代薄層色譜取代紙色譜（紙層析）技術作為一種快速、簡單、靈敏的鑒別手段應用于中藥材及中成藥的鑒別，薄層掃描用于許多中藥及中成藥的含量測定，并收載于中國藥典以來，在控制中藥質(zhì)量方面起到積極的作用，已為中藥生產(chǎn)及質(zhì)量監(jiān)督管理部門所廣泛認同。
    在早期的中國藥典的版本中，只有簡單的化學顏色反應和顯微鑒別，總灰分和含水量測量以及總浸出物測定，偶爾有總活性部位的含量測定，比如總生物堿，總黃酮，總皂苷等等。
薄層色譜法鑒別是在1985版中國藥典〔一部〕被**收載的，但由于受到當時可獲得的化學對照品的缺乏故僅限于個別的專論中。實踐表明化學對照品的缺乏阻礙了TLC鑒別在草藥中應用的拓展。甚至一些多數(shù)草藥共同含有的化學對照品對于質(zhì)量評價來說是不太重要的。為了解決TLC鑒別中的瓶頸問題，對照藥材(Reference Crude Drug; RCD)自1990版中國藥典起被引入了TLC鑒別項當中。眾所周知，TLC的****的優(yōu)勢是能夠提供類似圖畫的成像使得草藥中的成分組成能夠整體地被可視化。不同種屬的草藥產(chǎn)生的TLC圖像具有各自的專屬性。

2、薄層色譜在我國應用的現(xiàn)狀

我們在技術上則一直滯留在初始階段的狀態(tài)，逐漸與其他發(fā)達國家拉開了距離。

我國大多數(shù)實驗室依然使用實驗室自制薄層板，同時多半使用的是簡陋的器材，操作粗放，長期處在“低水平，廣覆蓋”的狀態(tài)。

3、薄層色譜在其他國家藥典中的應用

80年代后期雖然各國藥典逐漸傾向于應用液相色譜技術，但在草藥分析領域，薄層色譜仍然廣泛地被應用，尤其是歐洲國家。他們在器械、儀器、計算機化、自動化等方面都有快速的發(fā)展。

歐洲國家草藥分析實驗室已放棄了自制薄層板，均改用商品預制板，以避免因不同實驗室自制的薄層板質(zhì)量不一致而結果互有差異。

4、05版藥典在薄層鑒別收載方面的特點

1）、在已有的薄層鑒別中，增加了專屬性更強的藥材作對照。與對照品相比，本版藥典更強調(diào)使用對照藥材做鑒別，以增加整體專屬性，新增的513個TLC鑒別中，使用對照藥材的占61.6%。

2）、增加對照品同時作對照，使鑒別更具針對性和專屬性對照品和對照藥材同時使用，增強專屬性，空白不得有干擾

3）、將有較好專屬性的成分替換專屬性不佳的成分

四、薄層色譜法（TLC）在植物提取物行業(yè)的應用

1、植提原料、植物提取物及成品真?zhèn)舞b別

藥用植物的確定是薄層色譜*早的應用領域，通過比較同一塊薄層板上的樣品和對照物的差異進行判定。測試中樣品必須達到預先設定的標準，如數(shù)量、順序、位置和分離的條帶的顏色。對于植提原料，*簡便的方法是并排比較一個植提原料（參照物）和另一個植提原料（樣品）的HPTLC指紋圖譜。這一過程**需要規(guī)定的是所確立的需要檢測樣品的檢測靈敏度，即樣品可以通過測試，而其它樣品如摻雜物無法通過。HPTLC指紋圖譜的*大價值主要在于色譜的視覺印象，如果用多次檢測可以進一步擴展，可以檢測及描述各組分的光譜而無須知道每一斑點色譜的化學特性。另一優(yōu)點是薄層色譜總是能夠看到所有的樣品，并且?guī)讉€樣品可以很容易的并排比較。對于原料、植物提取物及成品都可進行鑒別。該方法也適用于復雜樣品如復方藥物。以西安銳博生物科技研發(fā)生產(chǎn)的紫錐菊提取物，紫錐菊多酚，菊苣酸為例。

圖為紫錐花屬根及常見偽品HPTLC色譜圖

從左到右分別為：紫錐菊、紫錐花、蒲草、狹葉紫錐菊、2E,4E,8Z,10E/Z-十二烷基四烯酸異丁基酰胺、 β-谷甾醇、蛇鞭菊、銀膠菊（2種不同樣品）。

2、穩(wěn)定性測試

藥用物質(zhì)及成品的穩(wěn)定性測試是HPTLC一個相當新的應用。在這一測試中需證明藥物在規(guī)定的儲藏條件下經(jīng)過一段時間不發(fā)生變化。另一方面，任何發(fā)生的變化需要能夠被檢測到。建立規(guī)定方法時通常對樣品采用強制降解，如光照、高溫、潮濕和水解等。采用HPTLC指紋圖譜進行穩(wěn)定性測試需要方法穩(wěn)定、重現(xiàn)性好。嚴格的標準化、圖像文檔及現(xiàn)代化儀器設備可以**達到要求 。

3、標示物定量

TLC在草藥分析中大多數(shù)的應用是對標示物進行定量分析。由于分離能力的限制，對于草藥這樣復雜的樣品通常無法完全分離所有成分，所以大多數(shù)測定采用HPLC。然而人們常常忽視，實際上，只要有合適的儀器及方法，HPTLC達到定量分析的要求并不困難。HPTLC具有樣品處理簡單，對特定的組分可采用特殊的優(yōu)化方法分離，可采用特殊的色譜前或色譜后衍生等優(yōu)點。但是，如果不作調(diào)整，大多數(shù)用于鑒別的指紋圖譜方法是不能用于定量分析的。以西安銳博生物科技研發(fā)生產(chǎn)的桑葉提取物，桑葉DNJ，桑葉黃酮為例。

五、西安銳博生物在產(chǎn)品質(zhì)量控制過程中也運用到薄層色譜，下圖為桑葉黃酮在254nm和365nm波長紫外光下觀察結果說明不同波長下產(chǎn)品和對照品斑點是相似的，證明西安銳博生物生產(chǎn)的桑葉提取物是正品。

西安銳博生物專注于植物提取物的研發(fā)與生產(chǎn)，核心產(chǎn)品有紫錐菊提取物，荷葉提取物，桑葉提取物，苦瓜提取物。歡迎查看我司原創(chuàng)的其他植物提取物技術文章。